篇一：11 实验十一 酮体的生成和利用
实验十一 酮体的生成和利用
【实验目的】
了解酮体的生成部位及掌握测定酮体生成与利用的方法。
【实验原理】
在肝脏线粒体中，脂肪酸经β-氧化生成的过量乙酰辅酶A缩合成酮体。酮体包括乙酰乙酸、β-羟丁酸和丙酮三种化合物。肝脏不能利用酮体，只有在肝外组织，尤其是心脏和骨骼肌中，酮体可以转变为乙酰辅酶A而被氧化利用。
本实验以丁酸为基质，与肝匀浆一起保温，然后测定肝匀浆液中酮体的生成量。另外，在肝脏和肌肉组织共存的情况下，再测定酮体的生成量。在这两种不同条件下，由酮体含量的差别我们可以理解以上的理论。本实验主要测定的是丙酮的含量。
酮体测定的原理：在碱性溶液中碘可将丙酮氧化成为碘仿。以硫代硫酸钠滴定剩余的碘，可以计算所消耗的碘，由此也就可以计算出酮体（以丙酮为代表）的含量。反应式如下：
CH3COCH3十3I2十4NaOH CHI3十CH3COONa十3NaI十3H2O
I2十2Na2S2O3Na2S4O6十2NaI
【实验材料】
1. 实验器材
试管；移液管；锥形瓶；滴定管及架。 2. 实验试剂
(1) 0.1% 淀粉液。 (2) 0.9% NaCl溶液。 (3) 15% 三氯乙酸。 (4) 10％ NaOH溶液。 (5) 10％ HCl溶液。
(6) 0.5mol/L丁酸溶液：取5ml丁酸溶于100ml 0.5mol/L NaOH中。
(7) 0.1mol/L碘液：I2 12.5g和KI 25g加水溶解，稀释至刻度1L，用0.1mol/L Na2S2O3
标定。
(8) 0.02mol/L Na2S2O3: 24.82g Na2S2O3·5H2O和400mg无水Na2CO3溶于1L刚煮沸的
水中，配成0.1mol/L溶液，用0.1mol/L KIO3标定。临用时将标定Na2S2O3溶液稀释成0.02mol/L。
【实验操作】
1.标本的制备：
将兔致死，取出肝脏，用0.9% NaCl洗去污血，放滤纸上，吸去表面的水分，称取肝组织5g置研钵中，加少许0.9% NaCl至总体积为10ml，制成肝组织匀浆。另外再取后腿肌肉 5g，按上述方法和比例，制成肌组织匀浆。
2.保温和沉淀蛋白质：
取试管3只，编号，按下表操作：
摇匀后，用滤纸过滤，将滤液分别收集在3支试管中,为无蛋白滤液。
3.酮体的测定
摇匀，静置10分钟，向各管中加入10% HCl 3ml,加1%淀粉液1滴呈兰色，分别用0.02mol/L Na2S2O3滴定至溶液呈亮绿色为止。
【实验结果与计算】
肝脏生成的酮体量（mmol/g）=(C－A)×Na2S2O3的摩尔数×1/6 肌肉利用的酮体量（mmol/g）=(C－B)×Na2S2O3的摩尔数×1/6
A: 滴定样品1消耗的Na2S2O3 ml数。 B: 滴定样品2消耗的Na2S2O3 ml数。 C: 滴定样品3消耗的Na2S2O3 ml数。
【思考题】
为什么只有在肝外组织，酮体才可以被氧化利用？
Experiment 11 Production and Degradation of Ketone Bodies
【Purpose】
Understand the production organs and master the method used for production and degradation of ketone bodies measurement.
【Principle】
Within the mitochondria of liver, the excess acetyl-CoA produced during fatty acid β-oxidation is converted to acetoacetate, β-hydroxybutyrate, and acetone, this group of molecules is called the ketone bodies. Liver can not use ketone bodies as an energy source. Only in several tissues out of liver, most notably cardiac and skeletal muscle, ketone bodies are converted to acetyl-CoA, the acetyl-CoA is then oxidated to generate energy .
We use butyric acid as initial stuff in this experiment, the butyric acid is heated with the liver plasm, and then measure the content of ketone bodies in liver plasm. Moreover, measure the content of ketone bodies under the condition of coexistence of liver plasm and skeletal muscle in reaction system. We can comprehend the above theories from the difference of the ketone bodies content under the two different conditions. We determine the content of acetone in this experiment.
The ketone bodies measurement principle is shown below: In alkaline aqua the iodine can oxidize acetone to become iodoform , titrate the remainder iodine in the reaction system with hyposulphite, we can calculate the consumption of iodine according to the result of hyposulphite titration, we can also calculate the content of ketone bodies (take acetone as to represent) according to the titration result.The equation of Reaction is as follows:
CH3COCH3十3I2十CHI3十CH3COONa十3NaI十3H2O
I2十2Na2S2O3Na2S4O6十2NaI
【Materials】
1. Apparatus:
Tubes, Pipets, Flasks Burettes and burette support. 2. Reagents:
(1) 0.1% aqua of starch. (2) 0.9% aqua of NaCl.
(3) 15% trichlorine acetic acid. (4) 10% aqua of NaOH. (5) 10% aqua of HCl.
(6) 0.5mol/L butyric acid: Dissolve 5ml butyric acid in 100ml 0.5mol/L NaOH.
⑺ 0.1mol/L aqua of iodine: Dissolve I2 12.5g and KI 25g in distilled water, dilute the solution to 1L, demarcate the solution with 0.1mol/L Na2S2O3.
⑻ 0.02 mol/L Na2S2O3: Dissolve 24.82 g Na2S2O3 · 5 H2O and 400 mg anhydrous Na2CO3 in 1L fresh boiled water to get 0.1 mol/L solution, demarcate the solution with 0.1 mol/L KIO3. Dilute the solution to 0.02 mol/L just before using.
【Procedures】
1. Preparation of the specimen:
Execute the rabbit, take out the liver, scour off the blood with 0.9% NaCl, put the liver on
filter paper to suck away the surface humidity, weigh 5 g of the liver organize, place it into the mortar, add a few 0.9% NaCl to total volume 10 ml. Then take 5 g muscle of rear leg, make it into the liver organization plasm according to above- mentioned method and comparisons.
2. Heat preservation and precipitation of the protein:
Take three tubes, number the tubes and operate as the table followed：
Filter with the filter paper
after shaking evenly, collect the filtrate respectively in 3 tubes, then we get the filtrate without protein.
3. Dete
Place Statically for 10 minutes after shaking evenly, add 10% HCl 3ml to each tube, and add one drop of 1% starch liquid to each tube, then we can see the solution presents the color of orchid, titrate with 0.02mol/L Na2S2O3 until the solution presents the color of bright green respectively. 【Result and calculation】
Ketone bodies produced in liver( mmol/g)=(C－A)×Moore content of the Na2S2O3 ×1/6 Ketone bodies consumed in muscle ( mmol/g)=(C－B)×Moore content of the Na2S2O3 ×1/6
A: volume of the Na2S2O3 (ml) consumed during titration of sample 1B: volume of the Na2S2O3 (ml) consumed during titration of sample 2 C: volume of the Na2S2O3 (ml) consumed during titration of sample３
【Advisement after experiment】
Ketone bodies are oxidated to generate energy only in several tissues out of liver. Why?
篇二：生物化学实验报告
生物化学实验报告
供检验护理
专业使用
班级
姓名
郑 州 大 学 护 理 学
院
实验一 血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳
[目的][原理]
[仪器组成]
[操作与结果]
[结果粘贴]
实验二 酶的特异性
[目的][原理]
[操作与结果]
将以上1、2、3号试管置于37℃水浴箱保温10分钟。然后向各管中加班氏试剂20滴，沸水中煮沸10分钟，取出勿振摇试管，观察结果并记录。
[分析]三管结果及原因。
实验三温度、pH、激活剂、抑制剂
对酶反应的影响
[目的][原理]
[操作与结果]
（一）温度对酶反应的影响
[分析各管的颜色变化原因]
（二）pH对酶反应的影响
[分析各管的颜色变化原因]
篇三：酮体生成和利用的生理意义
1酮体生成和利用的生理意义。
(1)酮体是脂酸在肝内正常的中间代谢产物，是甘输出能源的一种形式；（2）酮体是肌肉尤其是脑的重要能源。酮体分子小，易溶于水，容易透过血脑屏障。体内糖供应不足（血糖降低）时，大脑不能氧化脂肪酸，这时酮体是脑的主要能源物质。
2试述乙酰CoA在脂质代谢中的作用.
在机体脂质代谢中，乙酰CoA主要来自脂肪酸的β氧化,也可来自甘油的氧化分解；乙酰CoA在肝中可被转化为酮体向肝外运送，也可作为脂肪酸生物合成及细胞胆固醇合成的基本原料。
3试述人体胆固醇的来源与去路?
来源:⑴从食物中摄取⑵机体细胞自身合成 去路:⑴在肝脏可转换成胆汁酸⑵在性腺,肾上腺皮质可以转化为类固醇激素⑶在欺负可以转化为维生素D3⑷用于构成细胞膜⑸酯化成胆固醇酯，储存在细胞液中⑹经胆汁直接排除肠腔，随粪便排除体外。
4什么是血浆脂蛋白?试述血浆脂蛋白的分类,来源及生理功能?
血浆脂蛋白是脂质与载脂蛋白结合形成球形复合体,是血浆脂蛋白的运输和代谢形式。.血浆脂蛋白的分类方法有两种：1电泳法：可敬脂蛋白分为乳糜微粒(CM) β-脂蛋白, 前-β脂蛋白和α脂蛋白四类2超速离心法：可将脂蛋白分为乳糜微粒(CM)，极低密度脂蛋白(VLDL)，低密度脂蛋白(LDL)和高密度脂蛋白(HDL)四类，分别相当于电泳分离的CM、前β-脂蛋白、β-脂蛋白和α-脂蛋白四类。各种血浆脂蛋白的来源主要生理功能如下：①CM由小肠黏膜细胞合成,功能是转运外源性甘油三酯和胆固醇；②VLDL由肝细胞合成、分泌，功能是转运内源性甘油三酯和胆固醇;③LDL由VLDL在血浆中转化而来,功能是转运内源性胆固醇,即将胆固醇由肝转运至肝外组织;④HDL主要由肝细胞合成、分泌，功能是逆向转运胆固醇,即将胆固醇由肝外组织转运到肝。
1、酶的催化作用有何特点？
①具有极高的催化效率,如酶的催化效率可比一般的催化剂高10 8~1020倍；②具有高度特异性：即酶对其所催化的底物具有严格的选择性，包括：绝对特异性、相对特异性、立体异构特异性；③酶促反应的可调节性：酶促反应受多种因素的调控，以适应机体不断变化的内外环境和生命活动的需要。
2、距离说明酶的三种特异性(定义、分类、举例)。
一种酶仅作用于一种或一种化合物,或一定化学键,催化一定的化学反应,产生一定的产物,这种现象称为酶作用的特异性或专一性。根据其选择底物严格程度不同,分为三类:①绝对特异性:一种酶只能作用于一种专一的化学反应,生成一种特定结构的产物,称为绝对特异性.如：脲酶仅能催化尿素水解产生CO2和NH3,对其它底物不起作用;②相对特异性:一种酶作用于一类化合物或一种化学键,催化一类化学反应,对底物不太严格的选择性,称为相对特异性。如各种水解酶类属于相对特异性;举例:磷酸酶对一般的磷酸酯键都有水解作用,既可水解甘油与磷酸形成的酯键,也可水解酚与磷酸形成的酯键;③立体异构特异性:对底物的立体
构型有要求,是一种严格的特异性。作用于不对称碳原子产生的立体异构体;或只作用于某种旋光异构体(D-型或L-型其中一种),如乳酸脱氢酶仅催化L-型乳酸脱氢，不作用于D-乳酸等。
4、简述Km与Vm的意义。
⑴Km等于当V=Vm/2时的[S]。⑵Km的意义：①Km值是酶的特征性常数——代表酶对底物的催化效率。当[S]相同时,Km小——V大；②Km值可近似表示酶与底物的亲和力：1/Km大，亲和力大；1/Km小，亲和力小；③可用以判断酶的天然底物：Km最小者为该酶的天然底物。⑶Vm的意义:Vm是酶完全被底物饱和时的反应速率，与酶浓度成正比。
5、温度对酶促反应有何影响。
(1)温度升高对V的双重影响：①与一般化学反应一样，温度升高可增加反应分子的碰撞机会，使V增大；②温度升高可加速酶变性失活，使酶促反应V变小(2)温度对V影响的表现:①温度较低时，V随温度升高而增大(低温时由于活化分子数目减少，反应速度降低，但温度升高时，酶活性又可恢复)②达到某一温度时，V最大。使酶促反应V达到最大时的反应温度称为酶的最适反应温度(酶的最适温度不是酶的特征性常数)③反应温度达到或超过最适温度后，随着反应温度的升高，酶蛋白变性，V下降。
6、竞争性抑制作用的特点是什么？
(1)竞争性抑制剂与酶的底物结构相似(2)抑制剂与底物相互竞争与酶的活性中心结合(3)抑制剂浓度越大,则抑制作用越大，但增加底物浓度可使抑制程度减小甚至消除(4)动力学参数:Km值增大，Vm值不变。
7、 说明酶原与酶原激活的意义。
（1）有些酶（绝大多数蛋白酶）在细胞内合成或初分泌时没有活性，这些无活性的酶的前身物称为酶原。酶原激活是指酶原在一定条件下转化为有活性的酶的过程。酶原激活的机制：酶原分子内肽链一处或多处断裂，弃去多余的肽段，构象变化，活性中心形成，从而使酶原激活。(2)酶原激活的意义：①消化道内蛋白酶以酶原形式分泌，保护消化器官自身不受酶的水解（如胰蛋白酶），保证酶在特定部位或环境发挥催化作用；②酶原可以视为酶的贮存形式（如凝血酶和纤维蛋白溶解酶），一旦需要转化为有活性的酶，发挥其对机体的保护作用。 什么叫同工酶？有何临床意义？
（1）同工酶是指催化的化学反应相同，而酶蛋白的分子结构、理化性质及免疫学性质不同的一组酶下称为同工酶。（2）其临床意义：①属同工酶的几种酶由于催化活性有差异及体内分布不同，有利于体内代谢的协调。②同工酶的检测有助于对某些疾病的诊断及鉴别诊断.当某组织病变时,可能有特殊的同工酶释放出来,使该同工酶活性升高。如：冠心病等引起的心肌受损患者血清中LDH1和LDH2增高，LDH1大于LDH2；肝细胞受损患者血清中LDH5含量增高。
1、 简述糖酵解的生理意义
(1)在无氧和缺氧条件下，作为糖分解功能的补充途径(2)在有氧条件下，作为某些组织细胞主要的供能途径：①成熟红细胞(没有线粒体，不能进行有氧氧化②神经、白细胞、骨髓、视网膜、皮肤等在氧供应充足时仍主要靠糖酵解供能。 2、 简述糖异生的生理意义 (1)在饥饿情况下维持血糖浓度的相对恒定。（2）补充和恢复肝糖原。（3）维持酸碱平衡：肾的糖异生有利于酸性物质的排泄。（4）回收乳酸分子中的能量（乳酸循环）。
3、 简述血糖的来源和去路 血糖的来源：（1）食物糖类物质的消化吸收；（2）肝糖原的分解；（3）非糖物质异生而成。血糖的去路：（1）氧化分解功能；（2）合成糖原；（3）合成其它糖类物质；（4）合成脂肪或氨基酸等。
4、 糖酵解与有氧氧化的比较 糖酵解：反应条件：供氧不足或不需氧；进行部位：胞液；关键酶：己糖激酶（或葡萄糖激酶）、磷酸果糖-1、丙酮酸激酶；产物：乳酸、ATP；能量：1mol葡萄糖净得2molATP；生理意义：迅速供能，某些组织依赖糖酵解供能。有氧氧化：反应条件：有氧情况；进行部位：胞液和线粒体；关键酶：己糖激酶等三个酶及丙酮酸脱氢酶系、异柠檬酸脱氢酶、柠檬酸合酶、α-酮戊二酸脱氢酶系；产物：H2O、CO2、ATP;能量：1mol葡萄糖净得36mol或38molATP；生理意义：是机体获取能量主要方式
5、 在糖代谢过程中生成的丙酮酸可进入哪些代谢途径 (1)在供氧不足时，丙酮酸在LDH催化下，接受NADH+H的氢还原生成乳酸。(2)在供氧充足时,丙酮酸进入线粒体，在丙酮酸脱氢酶系的催化下，氧化脱羧生成乙酰CoA，再经三羧酸循环和氧化磷酸化，彻底氧化生成CO2、H2O和ATP。(3)丙酮酸进入线粒体在丙酮酸羧化酶催化下生成草酰乙酸，后者经磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶催化生成磷酸烯醇式丙酮酸，再异生成糖。（4）丙酮酸进入线粒体在丙酮酸羧化酶催化下生成草酰乙酸，后者与乙酰CoA缩合生成柠檬酸，可促进乙酰CoA进入三羧酸循环彻底氧化。（5）丙酮酸进入线粒体在丙酮酸羧化酶催化下生成草酰乙酸，后者与乙酰CoA缩合生成柠檬酸，柠檬酸出线粒体在细胞液中经柠檬酸裂解催化生成乙酰CoA，后者可作为脂肪酸、胆固醇等的合成原料。（6）丙酮酸可经还原性氨基化生成丙氨酸等非必需氨基酸。决定丙酮酸代谢的方向是各条代谢途径中关键酶的活性，这些酶受到别构效应剂与激素的调节。 简述三羧酸循环的要点及生理意义
要点：（1）TAC中有4次脱氢，2次脱羧，1次底物水平磷酸化（2）TAC中有3个不可逆反应，3个关键酶；（3）TAC的中间产物包括草酰乙酸在内起着催化剂作用，草酰乙酸的回补反应释丙酮酸的直接羧化或者经苹果酸生成；（4）三羧酸循环一周共产生12ATP。生理意义：（1）TAC是三大营养素彻底氧化的最终代谢通路；（2）是三大营养素代谢联系的枢纽；（3）可为其他合成代谢提供小分子前体（4）可为氧化磷酸化提供还原能量。
蛋白质
21、重组DNA技术常包括以下几个步骤：分离制备目的基因－“分”，切割目的基因和载体－“切”，目的基因与载体的连接－“接”，将重组DNA导入宿主细胞－“转”，筛选并鉴定含重组DNA分子的受体细胞克隆－“筛”，克隆基因在受体细胞内进行复制或表达－“表”。
1、 蛋白质的元素组成特点是什么？怎样计算生物样品中蛋白质的含量？
蛋白质的元素组成特点是含N,平均含量为16％，可用于推算未知样品中蛋白质的含量：100克样品中的蛋白质含量=每克样品含氮克数×6.25×100. 2、 何谓蛋白质的二级结构？二级结构主要有哪些形式？各有何特征？ 蛋白质的二级结构是指蛋白质分子中某一段肽键的局部结构，也就是该段肽链主链骨架原子的相对空间位置，并不涉及氨基酸残基侧链的构象。二级结构的主要形式有：α-螺旋，β-折叠、β-转角、无规则卷曲。特征：（1）α-螺旋：①主链骨架围绕中心轴盘绕形成右手螺旋；②螺旋每上升一圈是3.6个氨基酸残基，螺距为0.54nm；③相邻螺旋圈之间形成许多氢键；④侧链基团位于螺旋的外侧。
（2）β-折叠：①若干条肽链或肽段平行或反平行排列成片；②所有肽键的C=O和N-H形成链间氢键；③侧链基团分别交替位于片层的上、下方。（3）β-转角：多肽链180o回折部分，通常由四个氨基酸残基构成，借1、4残基之间形成氢键维系。（4）无规则卷曲：主链骨架无规律盘绕的部分。
3、何谓蛋白质的变性作用?引起蛋白质变性的因素有哪些?蛋白质变性的本质是什么?变性后有何特性？
(1)蛋白质的变性作用是指蛋白质分子在某些理化因素作用下,其特定的空间结构被破坏而导致理化性质改变及生物学活性丧失的现象。(2)引起蛋白质变性的因素:物理因素有加热、紫外线、X射线、高压、超声波等;化学因素有极端pH值(强酸、强碱)、重金属盐、丙酮等有机溶剂。(3)蛋白质变性的本质是:次级键
断链,空间结构破坏,一级结构不受影响。(4)变性后的特性：①活性丧失:空间结构破坏使Pr的活性部位解体②易发生沉淀:疏水基团外露,亲水性下降;③易被蛋白酶水解:肽键暴露出来④扩散常数降低，溶液的粘度增加。
4、比较DNA和RNA分子组成的异同？